建立了替米考星含量测定的HPLC方法，同事测定了复方替米考星颗粒中替米考星、黄安二甲氧嘧啶及甲氧苄啶的含量。采用Vertex C18色谱柱（5μm，4．6mm×250mm），
流动相为磷酸二丁胺缓冲液+乙腈+四氢呋喃+水（25:115:55:805），流速1．0mL/min，检测波长280mn。出峰顺序为甲氧苄啶、磺胺二甲氧嘧啶、替米考星反式结构、替米考星顺式结构，理论塔板数分别为7963、15714、3282、8701。两峰之间的分离度分别为24 29、3 92、2 91；拖尾因子分别为0.92、0.90、0.97、0.94。替米考星、磺胺二甲氧嘧啶、甲氧嘧啶的浓度线性范围分别是6.25~125ug/ml（RE²=0.996），3.125~62.5ug/ml（R²=0.996），0.625~12.5ug/ml（R²=0.999）；平均回收率分别为99.17%/99.06%和99.39%；RSD分别为0.8%、0.9%和0.9%。该法快速、灵敏、准确，适用于同时测定复方替米考星颗粒中三种成分的含量。 
  关键词：替米考星；黄安二甲氧嘧啶；甲氧苄啶；高效液相色谱法；含量 替米考星检测液相色谱仪
  复方替米考星颗粒系用替米考星、黄安二甲氧嘧啶、甲氧苄啶按一定比例配置而成的新型制剂。它客服了替米考星单方抗菌谱窄，不合适我国养殖业以混合感染为主的疫病防治的要求等缺点，利用协同抗菌增效机理，将新一代抗生素替米考星与黄安二甲氧嘧啶和抗菌增效剂甲氧苄啶按最佳配比进行复方。临床主要用于革兰氏阴阳性敏感菌引起的感染，如呼吸道、消化道、泌尿道感染。该制剂具有抗菌谱广、抗菌效力强等优点。但目前尚无同时测定替米考星、磺胺二甲氧嘧啶及甲氧嘧啶含量方法的报道。本实验旨在建立高兴液相色谱法同时检测上述三种成份含量的方法。 
  1 实验材料
  1.1仪器STI501高效液相色谱仪，配UV501检测器，；N2010色谱工作站；K型超声波清洗器，昆明市超声波仪器有限公司；DELTA320酸度计，BP-602N梅特勒电子天平；BP-211D电子天平，北京赛多利斯天平。
  1．2药品及试剂 替米考星对照品，批号K0310711，含量91.0%，中国兽医药品监察所；黄安二甲氧嘧啶对照品，批号46H1351，含量99.0%,SIGMA公司；甲氧苄啶对照品，批号H016704，含量100.0%，中国兽医药品监察所。公试品为实验室自制小样。替米考星，含量86.0%，山西奥信动物药业有限公司提供；黄安二甲氧嘧啶原料，含量98.0%，市场购入；甲氧嘧啶原料含量100%，市场购入。乙腈为色谱纯；水为超纯水；其余试剂均为分析纯。 
  2 方法与结果
  2.1色谱条件 
  以Eclipse XCN-C18(250nm×4.6nm，粒径5um)色谱柱，Vertex C18色谱柱，以磷酸二丁胺缓冲液-乙腈-四氢呋喃-水（25:115:55:805）为流动相，检测波长280nm，进样量10ul，流速1.0ml/min，柱温30℃。出峰顺序为甲氧苄啶、黄安二甲氧嘧啶、替米考星顺式结构。理论塔板数大于3000，分离度大于1.5，拖尾因子均再0.90-1.10。2.2 溶液的配置
  2.2磷酸二丁胺缓冲液的配置 
  取二丁胺16.8ml，加磷酸溶液（1-10）70ml，边加边搅拌，放置冷却后，用磷酸调节PH值至（2.5±0.1），加水至100ml，摇匀，即得。
  稀释液配置 取水900ml，加入磷酸5.71g用12.5mlo/l氢氧化钠溶液调节PH值至（2.5±0.1）
  0.5mg/ml甲氧苄啶对照液的配制 精密称取甲氧苄啶对照品25mg置50ml容量瓶中，加乙腈10ml使溶解，用稀释液稀释至刻度，摇匀。
  复方替米考星对照液的配置 精密称取替米考星对照品25mg、黄安二甲氧嘧啶对照品12.5mg精密加入2.22项下0.5mg/ml甲氧苄啶对照液5ml，置同一50ml容量瓶中，加乙腈10ml超声使溶解，用稀释液稀释至刻度，摇匀。
  2.3 系统适应性试验 取供试品溶液，按2.1项下色谱条件，进样10ul，系统适应性结果见表1和图1-4 结果显示，替米考星反式、顺势峰、黄安二甲氧嘧啶以及甲氧苄啶的理论塔板数均再3000以上，拖尾因子在0.90-1.10，分离度均大于1.5，说明该方法系统适应性良好。
  2.4 线性关系考察 分别精密量取2.24项下复方替米考星对照液2.5、1.25、0.1、0.075、0.05、0.025、0.0125ml置10ml容量瓶中，用稀释液稀释至刻度，摇匀。精密吸取10ul，注入液相色谱仪，按2.1项下色谱条件分析，测定各自峰面积，以浓度为横坐标（X,ug/ml）,以峰面积为纵坐标（y），进行线性回归

  参考文献：作者：闫春芝 林东下 赵红彦 秦朝